10X genomics 單細胞測序,動物細胞的培養(yǎng)、流式細胞術對細胞的各種參數(shù)分析等實驗必須基于單細胞的基礎上,根據(jù)不同實體組織成份的特點可選擇不同的消化組織分散細胞的方法,以達到單細胞產(chǎn)量高、細胞損傷小的目的。
極客基因努力摸索技術方法,針對不同組織進行處理時,盡可能采用對細胞損傷小、產(chǎn)率較高的單細胞懸液制備方法,最大限度地保持細胞原有的特性。
如小鼠脾臟、肝臟、心臟、肺臟、腦組織、腫瘤組織、人腫瘤組織、神經(jīng)、皮膚組織等。
需要,一般胰蛋白酶最常用,濃度一般0.25%-5%,37℃消化時間一般1-5min,用血清終止。
需要綜合考慮癌組織的形狀、面積等,注意不要混入壞死部分和未癌變的正常組織,要腫瘤細胞數(shù)量較多的組織,材料采集大小約為1cm3(0.5-1.0克)。間質(zhì)較多的組織,材料采集大小約為3cm3(1.0-3.0克)。微小樣本應保證有效癌變組織大于0.3克。
影響細胞計數(shù)準確性的一個重要因素是細胞儲液的濃度。研究發(fā)現(xiàn),細胞儲液的濃度在700-1200個細胞/μl的范圍內(nèi)是最理想的。超出這個最佳范圍,可能導致細胞計數(shù)的結(jié)果不可靠。如果樣本不在這個范圍內(nèi),建議相應地調(diào)整細胞儲液的濃度。